在離子色譜柱分離檢測過程中,分析物和基質(zhì)污染能使固定相受到影響,我們在使用過程中應(yīng)當(dāng)注意固定相表面特殊性質(zhì)可能與分析物相互作用而使反相色譜柱受到污染產(chǎn)生反壓問題,今天我們就來分析一下,導(dǎo)致IC離子色譜柱污染的因素有哪些?
在色譜柱上有很多填料,包括聚合物,聚合物表面涂上硅膠和氧化鋁,無機-有機混合物,涂層氧化鋯和石墨化碳都存在于這些鍵合硅膠上;為增加色譜柱的應(yīng)用,常利用各種流動相和添加物作用于色譜柱,添加物可以改變或修飾填料的表面,有時候還有可能會污染鍵合相表面;硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇,殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中,這些硅烷醇具有弱酸性,因此能與某些待分析物反應(yīng)成為基質(zhì)成分。
樣品中含有的鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些物質(zhì)是一些可能在使用時與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。有些物質(zhì)有比待測物或少或大的保留值,那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類一般來說在空體積時就被沖出色譜柱,這些非目標(biāo)產(chǎn)物的干擾能被檢測器檢測到而且能形成色譜峰,氣泡,基線上移或者是負峰。如果樣品成分在柱子中有很強的保留而且流動相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來,多次上樣后,這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會積累在柱頭。這些行為通常只有通過平行實驗才能發(fā)現(xiàn)。有著中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現(xiàn)為寬峰,基線擾動,或者基線漂移。
我們在對離子色譜柱進行維護時,要遵循這幾個原則:確保離子色譜不干燥,不長霉,不進顆粒物;不進入入可逆吸附物,特別是有機污染物,在一定的流速和壓力條件下運行。
在清洗離子色譜柱時,要遵循這幾個原則原則:用高濃度的淋洗液清洗強保留的污染物;用有機酸如草酸、酒石酸,檸檬酸等清洗金屬污染物;用有機溶劑兼容的大濃度清洗有機污染物;清洗之后,必須用二次去離子水平衡。雖然對有機溶劑兼容的離子色譜柱,受污染后都可以用清洗后再生,但并不是所有的污染物都能夠通過清洗去除的,正確使用離子色譜柱和采用合適的樣品預(yù)處理手段是延長離子色譜柱壽命的好方法。
離子色譜柱污染了怎么辦?如何清洗?
離子色譜柱的再生一般的情況下效果不是很好.應(yīng)該根據(jù)情況確定再生方法;一般鍵合硅石基質(zhì)的離子色譜柱可100%兼容有機溶劑,高聚物基質(zhì)的離子色譜柱交連度大于50%的也可100%兼容有機溶劑,可用純的有機溶劑來沖洗柱子以消除有機物的污染,但是應(yīng)注意一點有機溶劑沖洗以前先用甲醇/水混合物沖洗,再用100%甲醇沖洗,后用有機溶劑沖洗,再用100%甲醇沖洗,再用甲醇/水混合物沖洗,再用水沖洗,千萬不可直接用純有機溶劑沖洗,過后也千萬不可直接用水沖洗,對于交連度小于50%的高聚物色譜柱,因?qū)τ袡C溶劑的兼容性差,有機物沖洗對柱效都有損壞。如果柱子是由于蛋白質(zhì)、多環(huán)芳烴以及柱內(nèi)滋生菌類或藻類或樹脂發(fā)生分解這幾種情況解決的方法只能是更換色譜柱。
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